本文格式为WORD，能编辑和复制，感谢您的阅读。地龙脱氧核糖核酸酶的部分性质研究及作用初探作者：**杰：目的研究地龙体内两种新型脱氧核糖核酸酶(LDs)的部分生化性质,并对其作用进行初步探索。方法采用-200柱层析、毛细管等电聚焦电泳法、琼脂糖凝胶电泳等方法。结果初步得出LD1、LD2子量为126、62kDa；确定了等电点分别为6.12、6.05。LD1、LD2细菌质粒DNA、λDNA均有分解作用。结论地龙中的LDs是一种新型的脱氧核糖核酸酶。明确LDs的分子量、等电点有助于优化LDs取工艺以及LDs的进一步研究。对细菌质粒DNA、λDNA的降解提示LDs有可能对抗细菌的耐药性。地龙脱氧核糖核酸酶分子量(LDs).-phy,...126.05.λDNA..λ.：；；；pI地龙,又名蚯蚓,属无脊椎动物,环节动物门,寡毛纲。

地龙性寒味咸,功能清热平肝、熄风止痉、平喘、利尿、通络除痹。主治高热烦躁、惊厥抽搐、肺热喘咳、热结尿闭以及疮疡脓毒等症。国内外研究已发现,蚯蚓体内有溶栓酶、蚓激酶、胆碱酯酶、过氧化氢酶[1]、溶菌酶[2]、[3]等有效成分。作为有4000余年药用历史的地龙,对其开发利用还是远远不够。本课题组致力于地龙的研究,从地龙中分离纯化出脱氧核糖核酸酶样的物质(LDs)。本实验主要研究LDs分子量、等电点,并对其作用进行初步探索。证实LDs为新型的脱氧核糖核酸酶,具有不同的性质。同时为LDs的研究开发提供可靠的实验依据。1.1样品与试剂分离、纯化的LD1、LD2。蓝色葡聚糖2000(-2000),；,Fluka；毛细管等电聚焦试剂盒(cIEF3-10Kit)；质粒(),由本实验室自备；λDNA,Sigma公司产品。其它所用试剂均为分析纯。1.2主要仪器.2层析系统,公司；毛细管电泳仪：。2.1分子量测定凝胶过滤层析(分子筛)法：参照文献[4]方法。

2.2等电点测定毛细管等电聚焦电泳法：参照文献[5]方法。2.3LDs对质粒的降解作用质粒(),分别加入LD1、LD210μL,37反应30min后进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后分析结果。2.4LDs对λDNA的降解作用μLλDNA,分别加入LD1、LD210μL,37反应30min后进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后分析结果。3.1凝胶过滤层析(分子筛)测定LDs分子量以标准蛋白质洗脱体积为纵坐标,标准蛋白质分子量的对数为横坐标,绘制标准曲线。根据LD1、LD2的洗脱体积,查标准曲线,并计算出用-200测得LD1、LD2分子量分别为126、62kDa。3.2LDs等电点的测定结果毛细管等电聚焦法测定等电点的结果：LD1、LD2等电点分别为6.12、6.05。3.3LDs对质粒()的降解作用(见图1)LD1、LD2与质粒作用30min后电泳,EB染色观察,LD1、LD2底降解了质粒。倍比稀释的LD1、LD2分解质粒的作用减弱,可以看到仍有微弱的质粒条带出现。LDs对质粒有明显的降解作用,从图1中看不出LD1、LD2对质粒的降解作用有明显的差别。

3.4LDs对λDNA的降解作用(见图2)LDs与λDNA作用30min后进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后分析结果。LD1、LD2作用后的λDNA条带减弱,图2的下方有云雾状的阴影,为λDNA的降解产物。说明LD1、LD2有降解λDNA的作用。中看不出LD1、LD2对λDNA降解作用有明显的差别。脱氧核糖核酸酶(DNase)已在不同的物种中发现,目前针对其研究较多的是DNase、DNase。DNase是Sachs[6]1905年首次在牛胰腺中发现,现对DNase的研究已扩展到人、鸡、鼠、犬及鲤鱼等动物。已纯化出不同来源的DNase的分子量在32～41kDa范围之间,等电点在3.9～4.7之间。DNase存在于各种哺乳动物的组织中[7],尽管来自各种不同种属和组织的DNase的化学性质并不完全一样(如分子量、亚基结构),但这些酶的酶学性质非常相似。迄今已纯化出不同来源的DNase的分子量范围在26.5～45kDa之间。我们发现的LD1、LD2分子量为126、62kDa；等电点为6.12、6.05。LDs与DNase、DNase分子量有很大差别,分子量远远大于DNase、DNase；LDs的等电点也明显不同于DNase。

可以推测,LDs是新型的脱氧核糖核酸酶,具有不同的性质。质粒是细菌染色体以外能自主复制的,双链共价闭合环状DNA。细菌对药物产生抗性,原因多种。现在研究的热点是耐药性质粒(其携带耐药基因),质粒可以从一个细菌进入另一个细菌,耐药基因也从一个细菌传到另一个细菌,致细菌耐药性的广泛产生。噬菌体是感染细菌的一类病毒,有的噬菌体基因组较大,如λ噬菌体和T噬菌体。λ噬菌体由外壳蛋白和λDNA(线状双链DNA分子)组成。通过溶原性方式λDNA能整合到细菌染色体DNA中,与λDNA相毗邻的细菌基因有可能被噬菌体从一个细胞转移到另一个细胞(即转导),使遗传性状在不同细菌个体间传播。本实验表明,LDs能降解耐药质粒和λDNA,推测LDs有可能阻断细菌遗传形状的改变(如细菌的耐药性)。LDs彻底降解了质粒,同样条件下对λDNA是部分分解。λDNA为,远远大于质粒(：),LDs降解λDNA较质粒会困难些。在临床上重组人DNase()已用于治疗支气管扩张、肺脓疡等。现认为重组人DNase可以分解黏液中的DNA,减轻炎症从而发挥作用[8]。提示作为一种新脱氧核糖核酸酶的LDs 同样有可能对抗炎症,起 到治疗作用。

LDs 是新蛋白质,是蚯蚓开发的新思路。本实验研究了LDs 的部分性 质,为LDs 的深入实验及开发利用做了铺垫。LDs 的研究可以为地龙治 疗肺热喘咳、热结尿闭以及疮疡脓毒等症提供理论依据。 【教育出版社,1991.30－37. from imply wide [J]. Eur [J]. 李建武,萧能赓,余瑞元,等.生物化学实验原理和方法[M].北京：北京大学出版社,1994.209－211. 郭尧君.蛋白质电泳技术[M].第2版.北京：科学出版社,1999.125 －132. etal. gene： mouse[J]. J,2004,380(Pt 3)：929－937. etal. Human urine (DNase ： , , among [J]. Acta,1992,1119(2)：185－193. , etal. human DNase [J]. Proc Natl Acad Sci USA,1990,87(23)：9188－9192. 本文档由:文档精灵() 编辑和上传. 若有图片显示不完整脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶，下载后，把图片拉小就可以完整显示了. 若内容有缺省，可能因为内容过多。下载联系本人.